Ultrafiltrasiya santrifüj borusunun istifadəsi və ehtiyat tədbirləri
1) Uyğun ultrafiltrasiya borusunu seçin.Qeyd edək ki, UF membranları müxtəlif kimyəvi maddələrə qarşı dözümlülük səviyyəsi ilə fərqlənir.Tipik olaraq, molekulyar çəkisi 10 kDa olan ultrafiltrasiya boruları, məsələn, 35 kDa kimi maraq doğuran zülalın molekulyar çəkisinin 1/3-dən çox olmamalı olan molekulyar çəki kəsimi ilə seçilə bilər.Maraqlanan zülalın molekulyar çəkisi təxminən 10 kd olarsa, molekulyar çəkisi 3 KD olan ultrafiltrasiya borusundan istifadə edilə bilər.
(2) Təzə alınmış ultrafiltrasiya qurudur, istifadə etməzdən əvvəl çox təmiz su əlavə edilir və su membrandan, buz vannasından və ya soyuducudan tamamilə keçərək bir neçə dəqiqə əvvəlcədən soyudulur.Sonra su tökülür, yəni zülal mayesi və nə qədər əlavə olunur, hansının borunun yuxarısındakı ağ xəttdən çox deyil.Əməliyyat yüngüldür və zülal məhlulunu əlavə etməzdən əvvəl ultrafiltrasiya borusunu buz üzərində əvvəlcədən soyutmaq lazımdır.
3) Həm kütlə, həm də ağırlıq mərkəzi tarazlığa çatmalı idi.Qeyd edək ki, fırlanma sürəti və sürətlənməsi çox sürətli deyil, əks halda ultrafiltrasiya membranına birbaşa zərər verir.Mərkəzdənqaçma ultrafiltrasiyaya başlandı (sentrifuqa 4 dərəcəyə qədər soyudulmuş).Müxtəlif sentrifuqaların RPM-i g-ə çevrildikdən sonra fərqli oldu.Santrifüjün sürətləndirilməsi membrana təzyiqi azaltmaqla minimum səviyyəyə salındı.Qeyd edək ki, sentrifuqa təyinat sürətinə çatdıqdan sonra sentrifuqanı tərk etməyinizə əmin olun və ya probleminiz varsa, onu ilk dəfə idarə edə bilməyəcəksiniz.Membranın iş mili ilə istiqaməti təlimatlara uyğun olaraq tənzimləndi (bucaqlı sentrifuqa qutusu membrandan oxa perpendikulyardır).Praktik istifadədə ümumi fırlanma sürəti təlimatlarda göstəriləndən daha aşağıdır, beləliklə sentrifuqa borusunun ömrünü uzatmaq olar.
3) Həm kütlə, həm də ağırlıq mərkəzi tarazlığa çatmalı idi.Qeyd edək ki, fırlanma sürəti və sürətlənməsi çox sürətli deyil, əks halda ultrafiltrasiya membranına birbaşa zərər verir.Mərkəzdənqaçma ultrafiltrasiyaya başlandı (sentrifuqa 4 dərəcəyə qədər soyudulmuş).Müxtəlif sentrifuqaların RPM-i g-ə çevrildikdən sonra fərqli oldu.Santrifüjün sürətləndirilməsi membrana təzyiqi azaltmaqla minimum səviyyəyə salındı.Qeyd edək ki, sentrifuqa təyinat sürətinə çatdıqdan sonra sentrifuqanı tərk etməyinizə əmin olun və ya probleminiz varsa, onu ilk dəfə idarə edə bilməyəcəksiniz.Membranın iş mili ilə istiqaməti təlimatlara uyğun olaraq tənzimləndi (bucaqlı sentrifuqa qutusu membrandan oxa perpendikulyardır).Praktik istifadədə ümumi fırlanma sürəti təlimatlarda göstəriləndən daha aşağıdır, beləliklə sentrifuqa borusunun ömrünü uzatmaq olar.
(4) Qalan 1ml-ə konsentrasiya edildikdə, 50ul tampon məhlulu götürün, 10ul axın əlavə edin və ultrasüzgəc borusunda zülalın əskik olub-olmadığını müəyyən etmək üçün mavi rəngin olub-olmadığını yoxlayın.Boru sızdırarsa, ultrafiltrasiyaya başlamaq üçün yuxarı təbəqəni yenidən tökün və yeni boruya axın.Boruların buraxıldığını dəqiq müəyyən etmək üçün, zülal yapışdırıcısı və ya Bradford xam analizi üzərində işləyərək axmadan əvvəl 5 mqml BSA ilə 10 dəqiqə sentrifuqa edin və qalan konsentratlaşdırılmış zülal məhlulu (buz üzərində işləyən və zülalların istiləşməsinin qarşısını alan) əlavə etməklə davam edin. bütün konsentrat əlavə edilmişdir.Borunun bağlanmasına səbəb olan zülalların çökməsi baş verərsə, sentrifuqalama zamanı diqqətli olun.Yağış baş verərsə, yağıntının xüsusi səbəbinin həddindən artıq protein konsentrasiyası və ya uyğun olmayan tampon olub-olmadığını müəyyənləşdirin;Birincisi, eyni vaxtda birdən çox ultrafiltrasiya borularının ultrafiltrasiya edilməsi, konsentrasiyanın azaldılması, ikincisi isə zülalın çökməsi baş verənə qədər müxtəlif tampon məhlullarının mübadiləsi yolu ilə həll edilə bilər.
(4) Qalan 1ml-ə konsentrasiya edildikdə, 50ul tampon məhlulu götürün, 10ul axın əlavə edin və ultrasüzgəc borusunda zülalın əskik olub-olmadığını müəyyən etmək üçün mavi rəngin olub-olmadığını yoxlayın.Boru sızdırarsa, ultrafiltrasiyaya başlamaq üçün üst təbəqəni yenidən tökün və yeni boruya axın.Boruların buraxıldığını dəqiq müəyyən etmək üçün, zülal yapışdırıcısı və ya Bradford xam analizi üzərində işləyərək axmadan əvvəl 5 mqml BSA ilə 10 dəqiqə sentrifuqa edin və qalan konsentratlaşdırılmış zülal məhlulu (buz üzərində işləyən və zülalların istiləşməsinin qarşısını alan) əlavə etməklə davam edin. bütün konsentrat əlavə edilmişdir.Borunun bağlanmasına səbəb olan zülalların çökməsi baş verərsə, sentrifuqalama zamanı diqqətli olun.Yağış baş verərsə, yağıntının xüsusi səbəbinin həddindən artıq protein konsentrasiyası və ya uyğun olmayan tampon olub olmadığını müəyyənləşdirin;Birincisi, eyni vaxtda birdən çox ultrafiltrasiya borularının ultrafiltrasiya edilməsi, konsentrasiyanın azaldılması, ikincisi isə zülalın çökməsi baş verənə qədər müxtəlif tampon məhlullarının mübadiləsi yolu ilə həll edilə bilər.
(5) İlk bir neçə addım zülalın konsentrasiyası üçün istifadə olunur və bufer dəyişdiriləcəksə, təxminən 1 ml ümumi zülala yumşaq bir şəkildə yeni tampon əlavə edin (0,22 um ultrafiltrasiya membranı vasitəsilə ultrafiltrasiya) və üç dəfə təxminən 1 ml konsentrasiya edin. Ardıcıl dəfə, istənilən protein konsentrasiyasından asılı olaraq son konsentrasiya edilmiş son həcm, ümumiyyətlə 500ul-dən çox deyil, həm də 200ul daxilində.Üç dəfə 1000 × və ya daha çox, hər dəfə ən azı 10 × və ya daha çox həcm zənginləşdirmə ilə hesablandığı kimi, mahiyyətcə bufer dəyişikliyinə nail olun.
(5) İlk bir neçə addım zülalın konsentrasiyası üçün istifadə olunur və bufer dəyişdiriləcəksə, təxminən 1 ml ümumi zülala yumşaq bir şəkildə yeni tampon əlavə edin (0,22 um ultrafiltrasiya membranı vasitəsilə ultrafiltrasiya) və üç dəfə təxminən 1 ml konsentrasiya edin. Ardıcıl dəfə, istənilən zülal konsentrasiyasından asılı olaraq son konsentrasiya edilmiş son həcm, ümumiyyətlə 500ul-dən çox deyil, həm də 200ul daxilində.Üç dəfə 1000 × və ya daha çox, hər dəfə ən azı 10 × və ya daha çox həcm zənginləşdirmə ilə hesablandığı kimi, mahiyyətcə bufer dəyişikliyinə nail olun.
Göndərmə vaxtı: 09 noyabr 2022-ci il